發(fā)布時(shí)間：2013-08-30 09:45:11點(diǎn)擊數：2131次
在活細胞中以原子分辨率確定蛋白的三維結構，對結構生物學(xué)家來(lái)說(shuō)是一大挑戰。本期nature報告的兩項進(jìn)展，應能拓寬這一領(lǐng)域中一項很有希望的方法——細胞內nmr光譜的應用范圍。以前，光譜方法較低的靈敏度及樣本的短壽命，使得人們難以獲得足夠的結構信息來(lái)用這種方法確定蛋白結構。為nmr實(shí)驗收集數據一般需要一到兩天時(shí)間，這對活細胞來(lái)說(shuō)太長(cháng)了。sakakibara等人通過(guò)在2至3個(gè)小時(shí)內收集到足夠數據而克服了這一局限。他們報告了完全根據在活大腸桿菌中獲得的信息確定的第一個(gè)三維蛋白結構。
該原理證明研究中所用模型蛋白，是來(lái)自嗜熱菌的假設的重金屬結合蛋白ttha1718。此前，活細胞的細胞內nmr光譜僅限于細菌和非洲爪蟾卵母細胞，對活真核細胞的廣泛應用受到向這些細胞中輸送同位素標記蛋白效率相對較低的限制。現在，inomata等人發(fā)現，通過(guò)細胞穿透肽由吡啶酸調控的作用，有可能將合適標記的蛋白輸送到人細胞的細胞液中，所用細胞穿透肽通過(guò)共價(jià)鍵與目標蛋白相結合。當輸入的蛋白被內生酶活性或自體還原裂解作用釋放時(shí)，研究人員便能夠獲得活的人細胞內蛋白質(zhì)的高分辨率二維異核nmr光譜。這一方法有可能成為以細胞內蛋白為作用目標的藥物的設計及篩選工作的一個(gè)強大工具。
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